Role of the protective Renin-Angiotensin System in aldosterone and cortisol production in human adrenocortical cell lines (HAC15 and NCI-H295R), in human adrenal cortex, and in aldosterone-producing adenoma (APA)

Background: Angiotensin II (Ang-II) regulates aldosterone and cortisol secretion via type 1 angiotensin II receptor (AT1R) in the adrenal cortex. Although the type 2 angiotensin II receptor (AT2R) and Mas receptor (MasR), form an important part of the so-called protective renin-angiotensin system (RAS), and counter regulate AT1R-mediated effects in various tissues, their function in the adrenal cortex remains largely unknown. Furthermore, the angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2), another component of the protective RAS, cleaves Ang II and is also known to regulate effects of AT1R in several tissues. Aim: Therefore, our aim was to investigate: - the presence of AT2R, MasR, and ACE2 in human adrenocortical tissue and in aldosterone-producing adenoma (APA); - the role of Ang-(1-7) and compound 21 (C21), an AT2R agonist, and diminazene aceturate (DIZE) in modulation of aldosterone and cortisol production in humans. Methods: We detected AT2R, MasR, and ACE2 by immunoblotting and RT-PCR. Furthermore, using immunohistochemistry we localized AT2R and MasR in aldosterone-producing adenoma (APA) and in normal adrenal glang (NAG). We used Ang-(1-7) to stimulate MasR, C21 to stimulate AT2R, Ang II to stimulate AT1R and AT2R, and DIZE to activate ACE2. Irbesartan and A779 were used as blockers for AT1R and MasR respectively. RT-PCR was used to quantify CYP11B1/CYP11B2 genes expression at baseline and after stimulation. Results: AT2R and MasR were found to be heterogeneously express in human adrenal cortex and in APA. At low concentrations [nM], Ang-(1-7) had no effect on CYP11B1 and CYP11B2 gene expression, but at high concentrations [μM] it increased them. A779 did not significantly decrease the Ang-(1-7) effects, whereas irbesartan blunted them. In human adrenocortical cell lines (HAC15 and NCI-H295R), the AT2R-agonist C21 had no effect at low concentrations [nM], but at high concentrations [μM] it increased CYP11B1 and CYP11B2 expression. Irbesartan blunted these effects Finally, DIZE effect was no potent in CYP11B1 and CYP11B2 gene expression, but it may be involved in ACE2 gene expression increase. Conclusions: The expression of AT2R and MasR in the human adrenal cortex is, respectively 10-fold and 150-fold lower than AT1R. Moreover, whereas AT1R and MasR genes are expressed at the same level in the healthy adrenal cortex and in APA, AT2R gene expression is significantly lower in APA. The secretagogue effect of Ang-(1-7) and C21 on aldosterone and cortisol production seen with high concentrations likely occurs via AT1R. Thus, Ang-(1-7) and C21 may not be used as therapeutically tool to decrease aldosterone and cortisol production in human.

Background: L'angiotensina II (Ang-II) regola aldosterone e secrezione di cortisolo via di tipo 1 del recettore dell'angiotensina II (AT1R) nella corteccia surrenale. Anche se il tipo 2 del recettore dell'angiotensina II (AT2R) e del recettore Mas (Masr), costituiscono parte importante del cosiddetto sistema renina-angiotensina protettivo (RAS), e il contatore di regolare effetti AT1R mediata in vari tessuti, la loro funzione nel corteccia surrenale rimane in gran parte sconosciuta. Inoltre, l'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2), un altro componente della RAS di protezione, si unirà Ang II ed è noto anche per regolare gli effetti di AT1R in diversi tessuti. Obiettivo: Pertanto, il nostro obiettivo era quello di indagare: - La presenza di AT2R, Masr e ACE2 nel tessuto adrenocorticale umana e aldosterone adenoma (APA); - Il ruolo di Ang (1-7) e composto di 21 (C21), un agonista AT2R, e Diminazene aceturato (Dize) nella modulazione di aldosterone e cortisolo produzione negli esseri umani. Metodi: Abbiamo rilevato AT2R, Masr, e ACE2 da immunoblotting e RT-PCR. Inoltre, utilizzando l'immunoistochimica abbiamo localizzato AT2R e Masr in aldosterone producono adenoma (APA) e in normale gLang surrene (NAG). Abbiamo usato Ang (1-7) per stimolare Masr, C21 per stimolare AT2R, Ang II per stimolare AT1R e AT2R, e Dize di attivare ACE2. Irbesartan e A779 sono state usate come bloccanti rispettivamente per AT1R e Masr. RT-PCR è stato utilizzato per quantificare l'espressione dei geni CYP11B1 / CYP11B2 al basale e dopo stimolazione. Risultati: AT2R e Masr sono risultati essere eterogeneo espressa in corteccia surrenale umana e in APA. A basse concentrazioni [Nm], Ang (1-7) non ha avuto effetti sulla espressione genica e CYP11B1/CYP11B2, ma ad alte concentrazioni [mM] li aumenta. A779 non è diminuito in modo significativo il Ang (1-7) gli effetti, mentre irbesartan loro smussati. In linee cellulari umane surrenalici (HAC15 e NCI-H295R), il AT2R-agonisti C21 non ha avuto effetto a basse concentrazioni [Nm], ma ad alte concentrazioni [micron] è aumentata CYP11B1 e CYP11B2 espressione. Irbesartan smussati questi effetti Infine, effetto Dize non era potente nel CYP11B1 e l'espressione genica CYP11B2, ma può essere coinvolto in aumento dell'espressione genica ACE2. Conclusioni: L'espressione di AT2R e Masr nella corteccia surrenale umano è, rispettivamente di 10 volte e 150 volte inferiori rispetto AT1R. Inoltre, mentre AT1R e Masr geni sono espressi allo stesso livello nel sano corteccia surrenale e in APA, AT2R espressione genica è significativamente più bassa in APA. L'effetto secretagogo di Ang (1-7) e C21 sulla aldosterone e cortisolo produzione visto con alte concentrazioni probabilmente avviene attraverso AT1R. Così, Ang (1-7) e C21 non possono essere utilizzate come strumento terapeutico per diminuire aldosterone e cortisolo.