Valutazione del rischio di trattamenti illeciti nel bovino da carne con desametasone mediante l’impiego di cortisolo e 6beta-idrossicortisolo in campioni di urina

Il 6beta-idrossicortisolo (6betaOH-F) nell’uomo e in molti animali tra cui il bovino, è uno dei metaboliti del cortisolo (F) prodotti a livello epatico. Il 6betaOH-F è escreto nelle urine in forma non coniugata e rappresenta l’1% del totale dei metaboliti del cortisolo nell’uomo (Galteau et al., 2003). Ged et al. (1989) furono i primi a dimostrare che la trasformazione del cortisolo in 6betaOH-F è catalizzata dal CYP3A e quindi il monitoraggio della sua concentrazione urinaria può essere utilizzato come marker in vivo dell’induzione e dell’inibizione delle isoforme CYP3A (Galteau et al., 2003). L’urina è una matrice molto complessa, la cui composizione, le proprietà chimico-fisiche ed anche le concentrazioni di biomarcatori fisiologici possono essere influenzate nella stessa specie bovina da fattori quali l’alimentazione, l’età e le condizioni di stabulazione ed anche eventuali trattamenti farmacologici. L’urina è una matrice che può essere facilmente raccolta in allevamento, senza causare situazioni stressanti per gli animali, e congelata può essere conservata per tempi relativamente lunghi. I meccanismi che regolano la liberazione di F endogeno sono molto articolati. Le modalità di regolazioni caratteristiche dell’asse ipotalamo – ipofisi - surrene (HPA) sono tre: - il ritmo circadiano della steroidogenesi basale; - l’incremento della steroidogenesi in risposta allo stress (Schimmer et al., 2006). - la regolazione a feedback negativo da parte dei corticosteroidi surrenalici. Quindi le variazioni di cortisolo e del suo metabolita possono dare delle indicazioni di eventuali trattamenti con corticosteroidi. Inoltre una volta valutate separatamente le concentrazioni di F e del suo metabolita 6betaOH-F il rapporto tra 6betaOH-F e cortisolo permette di normalizzare eventuali differenze di produzione di 6betaOH-F dovute alle variazioni del ritmo circadiano e alla variabilità individuale (Ohno et al., 2000). Nella prima fase del lavoro i campioni di urina raccolti dai vitelli appartenenti ai diversi gruppi sperimentali sono stati analizzati al fine di determinare la concentrazione urinaria di cortisolo (F) e 6beta-idrossicortisolo (6betaOH-F) utilizzando un metodo RIA e un metodo ELISA, rispettivamente. Prima di passare all’esecuzione delle indagini sui vari gruppi sottoposti a trattamenti è stato necessario procedere alla validazione dei due metodi utilizzati (RIA e ELISA) con urine di vitelli prelevati da animali controllo quindi non trattate e filtrate su carbone attivo per valutare adeguatamente le performance dei metodi applicati utilizzando il protocollo messo a punto da Simontacchi et al. (1997). Il pattern di escrezione urinaria del cortisolo e del suo metabolita negli animali trattati sperimentalmente con desametazone, identificato attraverso l’utilizzo dei test di screening RIA ed ELISA, è stato successivamente confermato mediante analisi in spettrometria di massa (LC-MS/MS). La concordanza dei risultati ha dimostrato che cortisolo e 6beta-idrossicortisolo possono essere considerati efficaci marcatori di trattamento illecito con desametazone. Infatti l’effetto della loro ridotta escrezione nelle urine è più duraturo della eliminazione di desametazone somministrato, quindi rappresenta un valido supporto nell’indagine preliminare per la valutazione dei trattamenti illeciti in allevamento. In particolare il contenuto urinario di cortisolo, è risultato il parametro caratterizzato da maggior capacità discriminante; la sua valutazione mediante test RIA consente di eseguire piani di sorveglianza conoscitivi in allevamento, su larga scala con costi contenuti